Nombre del Producto/Descripción	No. of Tests	Product Code
K-Ras Mutation Analysis Kit for Real-Time PCR (exons 2, 3 and 4)	50	KRAS-RT50
K-Ras/B-Raf Mutation Analysis Panel Kit for Real-Time PCR (exons 2, 3 and 4 of KRAS and V600E of BRAF)	50	KRBR-RT50

Mutaciones de KRAS/BRAF y Cáncer

El gen KRAS codifica para una pequeña GTPasa que juega un rol central en la transducción de señales desde el Receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico a efectores corriente abajo.
Las mutaciones de KRAS han sido halladas comúnmente en varios tipos de cánceres humanos, tales como cáncer colorectal metastásico (mCRC), adenocarcinoma de pulmón y cáncer de tiroides. La mayoría de las mutaciones más comunes son halladas en los codones 12, 13 y 61.

Varios estudios han demostrado que los tumores que portan algunas de estas formas mutantes en el gen KRAS son menos respondedores a la terapia con anticuerpos monoclonales anti-EGFR.
La ASCO (American Society of Clinical Oncology) recientemente ha llevado a cabo su primera Opinión Clínica Provisional (PCO), sugiriendo hacer el screening de las mutaciones de KRAS para todos aquellos pacientes que van a recibir la terapia con los anticuerpos monoclonales anti-EGFR.

Estudios recientes han demostrado que no todos los pacientes con mCRC con KRAS wild-type responden a la terapia anti-EGFR. Esto sugiere que genes y/o vías de señalización adicionales pueden estar implicados en el mecanismo de resistencia a estas drogas. Las mutaciones en BRAF, otro efector corriente abajo de la via EGF activada, ha sido identificada en un 8% de pacientes con mCRC y muestran resistencia a la terapia anti-EGFR. Estos pacientes también tienen una disminución de la supervivencia libre de progresión (SLP) y sobrevida global (SG) cuando son tratados con antagonistas del EGFR.

Estos hallazgos sugieren que el screening de las mutaciones de KRAS y BRAF son necesarios para identificar con exactitud células tumorales que no responderán a las drogas anti-EGFR.

Procedimiento y análisis

El kit para análisis de mutaciones de los genes KRAS es una reacción de PCR en Tiempo Real que usa sondas alelo específicas para identificar la presencia de las mutaciones de KRAS en los exones 2, 3 y 4. El procedimiento implica 4 pasos simples:
* Purificación de DNA de biopsias tumorales, tejidos fijados y embebidos en parafina (FFPE), tejidos tumorales frescos ó líneas celulares tumorales.
* Amplificación de las regiones de los genes KRAS usando sondas alelo-específicas.
* Detección del producto de amplificación por PCR en Tiempo Real: requiere un equipo de PCR en Tiempo Real capaz de detectar los fluorocromos FAM y VIC.
* Registro e interpretación de los resultados.
Este test puede ser completado en 2 horas aproximadamente a partir de DNA purificado para obtener un resultado.

K-Ras Mutation Analysis panel Kit es para Uso en Investigación (RUO).

Nombre del Producto/Descripción	No. of Tests	Product Code
K-Ras Mutation Analysis Kit for Real-Time PCR (exons 2, 3 and 4)	50	KRAS-RT50
K-Ras/B-Raf Mutation Analysis Panel Kit for Real-Time PCR (exons 2, 3 and 4 of KRAS and V600E of BRAF)	50	KRBR-RT50

Mutaciones de KRAS/BRAF y Cáncer

El gen KRAS codifica para una pequeña GTPasa que juega un rol central en la transducción de señales desde el Receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico a efectores corriente abajo.
Las mutaciones de KRAS han sido halladas comúnmente en varios tipos de cánceres humanos, tales como cáncer colorectal metastásico (mCRC), adenocarcinoma de pulmón y cáncer de tiroides. La mayoría de las mutaciones más comunes son halladas en los codones 12, 13 y 61.

Varios estudios han demostrado que los tumores que portan algunas de estas formas mutantes en el gen KRAS son menos respondedores a la terapia con anticuerpos monoclonales anti-EGFR.
La ASCO (American Society of Clinical Oncology) recientemente ha llevado a cabo su primera Opinión Clínica Provisional (PCO), sugiriendo hacer el screening de las mutaciones de KRAS para todos aquellos pacientes que van a recibir la terapia con los anticuerpos monoclonales anti-EGFR.

Estudios recientes han demostrado que no todos los pacientes con mCRC con KRAS wild-type responden a la terapia anti-EGFR. Esto sugiere que genes y/o vías de señalización adicionales pueden estar implicados en el mecanismo de resistencia a estas drogas. Las mutaciones en BRAF, otro efector corriente abajo de la via EGF activada, ha sido identificada en un 8% de pacientes con mCRC y muestran resistencia a la terapia anti-EGFR. Estos pacientes también tienen una disminución de la supervivencia libre de progresión (SLP) y sobrevida global (SG) cuando son tratados con antagonistas del EGFR.

Estos hallazgos sugieren que el screening de las mutaciones de KRAS y BRAF son necesarios para identificar con exactitud células tumorales que no responderán a las drogas anti-EGFR.

Procedimiento y análisis

El kit para análisis de mutaciones de los genes KRAS/ BRAF es una reacción de PCR en Tiempo Real que usa sondas alelo específicas para identificar la presencia de las mutaciones de KRAS en los exones 2, 3 y 4 y la mutación de BRAF V600E. El procedimiento implica 4 pasos simples:
* Purificación de DNA de biopsias tumorales, tejidos fijados y embebidos en parafina (FFPE), tejidos tumorales frescos ó líneas celulares tumorales.
* Amplificación de las regiones de los genes KRAS y BRAF usando sondas alelo-específicas.
* Detección del producto de amplificación por PCR en Tiempo Real: requiere un equipo de PCR en Tiempo Real capaz de detectar los fluorocromos FAM y VIC.
* Registro e interpretación de los resultados.
Este test puede ser completado en 2 horas aproximadamente a partir de DNA purificado para obtener un resultado.

K-Ras/B-Raf Mutation Analysis panel Kit es para Uso en Investigación (RUO).

Nombre del Producto/Descripción	No. de Tests	Codigo del Producto
NRAS Mutation Detection Kit	50	NRAS-RT50

NRAS es un miembro de la familia de GTPasas RAS y juega un rol central en la via de señalización de la MAPK.

Las mutaciones activantes en el exón 2 (codon 12/13), exón 3 (codon 61) y exón 4 (codón 146) han sido hallada en varios tumores malignos, incluído melanoma (13-25%), cáncer colorectal (1-6%), cáncer de pulmón (1%), carcinoma hepatocelular (10%), leucemias mieloides (14%), y carcinoma de tiroides (7%).

Procedimiento y análisis

El kit para el análisis de mutaciones del gen NRAS es una reacción de PCR en Tiempo Real que usa primers alelo específicos para identificar la presencia de las mutaciones de NRAS en los exones 2, 3 y 4. El procedimiento implica 4 pasos simples:
* Purificación de DNA de biopsias tumorales, tejidos fijados y embebidos en parafina (FFPE) ó tejidos tumorales frescos.
* Amplificación de las regiones del gen NRAS usando primers alelo-específicos.
* Detección de los productos de amplificación por PCR en Tiempo Real capaz de detectar los fluorocromos FAM y VIC.
* Registro e interpretación de los resultados.
Este test puede ser completado en 2 horas aproximadamente a partir de DNA purificado para obtener un resultado.

NRAS Mutation Analysis panel Kit es para Uso en Investigación (RUO).

Download brochure

Product Name/Description	No. of Reactions*	Product Code
RAS Mutation Screening Panel	50	RAS-RT50

Mutaciones de RAS y Cáncer

KRAS y NRAS son miembros de la familia de GTPasas RAS y cumplen un rol central en la vía de señalización de la MAPK

Las mutaciones activantes en el exón 2 (codón 12/13), exón 3 (codón 59/61) y exón 4 (codón 117/146) han sido halladas en varios tipos de cánceres humanos, incluyendo cáncer colorectal metastásico (mCRC).

Estudios clínicos recientes que usaron la terapia dirigida anti-EGFR en pacientes diagnosticados con cáncer colorectal han demostrado que los tumores que portan las mutaciones de KRAS y NRAS son menos respondedores a esta terapia que aquellos sin estas mutaciones.

Características del Kit

El panel de screening de mutaciones de RAS detecta mutaciones somáticas halladas en los exones 2, 3 y 4 de los genes KRAS y NRAS. Debajo está una tabla de las mutaciones detectada por este kit.

Gene	Mutation	Group
KRAS	G12A, G12D, G12R, G12V, G13D	1
G12C, G12S	2
Q61H, Q61L, Q61R, A59E, A59G, A59T	3
K117N, K117R, K117E	4
A146T, A146P, A146V	5
NRAS	G12D, G12C, G12S, G13R, G13V, K117R	6
Q61H, Q61L, Q61K, Q61R	7
A59D, A59T, A146T	8

El panel de screening de mutaciones de RAS es una reacción de PCR en Tiempo Real que usa primers alelo específicos en una reacción multiplex para identificar la presencia de las mutaciones en un total de 8 reacciones por muestra. El test no distingue entre las mutaciones dentro de cada grupo.

El procedimiento implica 3 pasos simples:

• Purificación de DNA de biopsias tumorales, tejidos fijados y embebidos en parafina (FFPE) ó tejidos tumorales frescos..
• Amplificación de de las regiones de los genes RAS usando primers alelo-específicos.
• Detección del producto de amplificación un equipo de PCR en Tiempo Real capaz de detectar los fluorocromos FAM y VIC.

Este test puede ser completado en 2 horas aproximadamente a partir de DNA purificado para obtener un resultado.

El panel de screening de mutaciones de RAS es para Uso en Investigación (RUO).

Nombre del Producto/Descripción	No. of Tests	Product Code
B-Raf V600E/K/D/R/M/G Mutation Analysis Kit for Real-Time PCR	64	BRAFX-RT64

El gen BRAF codifica para una serina/treonina proteína kinasa, la cual juega un rol en la vía de señalización MAP Kinasa/ERK, afectando el crecimiento y la proliferación celular. Mutaciones somáticas en este gen han sido halladas en varios cánceres incluyendo Linfoma No-Hodgkin, cáncer colorectal, melanoma, carcinoma papilar de tiroides, carcinoma de pulmón de células no pequeñas y adenocarcinoma de pulmón.

La mayoría de las mutaciones más comunes de BRAF ocurren en el codón 600, donde la sustitución de un aminoácido en el segmento de activación del dominio kinasa crea una proteína activada en forma constitutiva.
Las mutaciones en BRAF son generalmente halladas en tumores que son wild- type para K-Ras, N-Ras y EGFR. Procedimiento y Análisis

La siguiente tabla describe las mutaciones detectadas por este kit y su frecuencia:

Nombre de la Mutación	Cambio de Nucleótido	Cambio de Aminoácido	Frecuencia
V600E	c.1799T>A	Valine (V) to glutamic acid (E)	70-90%
V600K	c.1798_1799GT>AA	Valine (V) to lysine acid (K)	10-15%
V600D	c.1799_1800TG>AT	Valine (V) to aspartic acid (D)	<5%
V600R	c.1798_1799GT>AG	Valine (V) to arginine (R)	<5%
V600M	c.1798G>A	Valine (V) to methionine (M)	<1%
V600G	c.1799T>G	Valine (V) to glicine (G)	<1%

El kit para el análisis de las mutaciones del codón 600 de BRAF es una reacción de PCR en Tiempo Real que usa primers alelo específicos para identificar la presencia de las mutaciones BRAFV600E, V600K, V600D, V600R, V600M y V600G. El procedimiento implica 3 pasos simples:
* Purificación de DNA de biopsias tumorales, tejidos fijados y embebidos en parafina (FFPE) ó tejidos tumorales frescos.
* Amplificación de las regiones del gen BRAF usando sondas alelo-específicas.
* Detección del producto de amplificación por PCR en Tiempo Real: requiere un equipo de PCR en Tiempo Real capaz de detectar los fluorocromos FAM y VIC.
Este test puede ser completado en 2 horas aproximadamente a partir de DNA purificado para obtener un resultado.

B-Raf Codón 600 Mutation Analysis Kit II es para Uso en Investigación (RUO).

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Panel de detección de mutaciones de cáncer colorrectal para PCR en tiempo real	48	CRC-RT48

* Incluye todos los controles.

Mutaciones y cáncer de KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA y AKT1

El cáncer colorrectal (CCR) se desarrolla a través de una acumulación progresiva de alteraciones genéticas que codifican las proteínas involucradas en las vías aguas abajo del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). Las mutaciones somáticas de KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA y AKT1 se encuentran comúnmente en CCR con una prevalencia de 36-40%, 1-6%, 8-10%, 10-30% y 1-6%, respectivamente.

El gen KRAS codifica una pequeña GTPasa que desempeña un papel clave en la transducción de señales del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) a los efectores posteriores. Las mutaciones de KRAS se han encontrado comúnmente en varios tipos de tumores malignos humanos, como el cáncer colorrectal metastásico (mCRC), el adenocarcinoma de pulmón y el cáncer de tiroides. Las mutaciones más comunes se encuentran en los codones 12 y 13 de KRAS. Varios estudios han demostrado que los tumores que portan cualquiera de estas formas mutantes del gen KRAS tienen menos probabilidades de responder a la terapia con anticuerpos anti-EGFR ( Van Cutsem et al. 2011) La Sociedad Estadounidense de Oncología Clínica (ASCO) lanzó recientemente su primera Opinión Clínica Provisional (PCO) que sugiere que todos los pacientes a los que se administre terapia de anticuerpos monoclonales anti-EGFR se deben examinar para detectar mutaciones de KRAS. Estudios recientes también han demostrado que no todos los pacientes con mCRC con tumores KRAS de tipo salvaje responden a la terapia anti-EGFR ( Shaib et al. 2013 ). Esto sugiere que genes y / o vías adicionales pueden estar involucrados en el mecanismo de resistencia a estos medicamentos. Se han identificado mutaciones en BRAF, otro efector aguas abajo de la vía activada por EGF, en hasta 8-10% de los tumores mCRC. Los estudios con pacientes con mCRC han demostrado resistencia a la terapia anti-EGFR en pacientes con tumores que expresan BRAF mutado (Di Nicolantonio y col. 2008 ). Esos mismos individuos también tuvieron una disminución en la supervivencia libre de progresión (PFS) y en general (OS) cuando fueron tratados con antagonistas de EGFR.

En los cánceres de colon sin mutación KRAS o BRAF, la presencia de una mutación NRAS también está relacionada con la resistencia a la terapia anti-EGFR. NRAS es miembro de la familia RAS de GTPasas y desempeña un papel central en la ruta de señalización de MAPK. Se han encontrado mutaciones activadoras en el exón 2 (codón 12/13), el exón 3 (codón 61) y el exón 4 (codón 146) en varios tipos de cáncer y se encuentran en 1-6% de los cánceres colorrectales. Estos hallazgos sugieren que la detección de mutaciones KRAS, BRAF y NRAS es necesaria para identificar con mayor precisión las células tumorales que no responden a los medicamentos anti-EGFR.

Se han asociado biomarcadores adicionales como PIK3CA con una falta de respuesta a la terapia anti-EGFR ( Mao et al. 2012 ), aunque su papel pronóstico aún es un tema de debate. Sin embargo, PIK3CA representa uno de los genes mutados con mayor frecuencia en CCR, con aproximadamente 10% a 30% de CCR que albergan mutaciones activadoras de PIK3CA.Estas mutaciones somáticas ocurren comúnmente en el exón 9, que codifica el dominio helicoidal y el exón 20, que codifica el dominio de la quinasa. El gen PIK3CA codifica la subunidad p110a de la fosfatidil 3-quinasa, un lípido involucrado en la vía PI3K-AKT-mTOR que regula el crecimiento celular, la supervivencia y la proliferación. Otra proteína clave que funciona como un componente de la vía de señalización de PI3K es AKT1, una serina-treonina quinasa. AKT1 es un mediador aguas abajo de PI3 quinasa. Una mutación somática que sustituye el ácido glutámico (E) con lisina (K) en la posición de aminoácido 17 da como resultado una forma constitutivamente activa de la enzima que ya no depende de la activación de los componentes aguas arriba de la vía. La mutación AKT1 E17K se ha encontrado en varios tipos de cáncer, incluidos colon, pulmón y mama.Carpten y col. 2007) . Además, los tumores con la mutación AKT1 E17K son generalmente negativos para las mutaciones de EGFR, KRAS y ALK.

La siguiente tabla enumera la frecuencia de 5 mutaciones oncogénicas comunes detectadas en CCR.

Oncogen	Prevalencia%	Referencias
KRAS	36-40	Faulkner y col. 2010 ; COSMIC; Neumann y col. 2009
PIK3CA	10-30	COSMIC; Samuels y col. 2004
BRAF	8-10	Varghese y col. 2015 ; Tejpar y col. 2010
NRAS	1-6	COSMIC; De Roock y col. 2010 ; Irahara y col. 2009  ; Vaughn y col. 2011
AKT1	<1-6	COSMIC; Fumagalli y col. 2008 ; Kim y col. 2008

Características del kit

El panel de detección de mutaciones del cáncer colorrectal detecta mutaciones somáticas que se encuentran en los genes KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA y AKT1. A continuación se muestra una lista de mutaciones detectadas por este kit.



Procedimiento de prueba y análisis

 

El Panel de detección de mutaciones del cáncer colorrectal de EntroGen es un ensayo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que utiliza cebadores específicos de alelos en una reacción múltiple para identificar la presencia de mutaciones KRAS, NRAS, BRAF, PIK3CA y AKT1 en un total de 6 reacciones por muestra . El procedimiento de prueba implica tres (3) pasos simples:

• Aislamiento de ADN de biopsias tumorales, secciones embebidas en parafina (FFPE) o tumores frescos congelados.
• Amplificación de ADN utilizando los reactivos proporcionados en el kit.
• Análisis e informes automatizados utilizando software propietario.

Esta prueba se puede completar en aproximadamente 2 horas desde el aislamiento del ADN hasta los resultados de la prueba.

 

 

Equipos y materiales

El panel de detección de mutaciones del cáncer colorrectal de EntroGen requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM, ROX, CY5 y VIC.

Esta prueba incluye reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN no están incluidos.

CRC-RT48 es para Uso en Investigación (RUO)

 

PDGFRA y c-KIT Mutaciones en GIST 
Los tumores del estroma gastrointestinal (GIST) son los tumores mesenquimales más comunes del tracto gastrointestinal. Más del 80% de los GIST albergan la mutación activadora en c-KIT y aproximadamente el 5-7% en PDGFRA. Aunque estas mutaciones causan tumorigénesis, también predicen la respuesta a las terapias dirigidas y proporcionan información pronóstica.

El panel de detección de mutaciones GIST detecta las siguientes mutaciones:

Gene	Mutación	Identificación cósmica
PDGFRA c-Kit	EX18_p.D842V EX11_p.V559D EX11_p.V559G EX11_p.V560D EX11_W557R EX17_p.D816H EX17_p.D816v EX11_p.L576P EX13_p.K642E EX9_p.Y503_F504insAY EX11_p.W557_E561del EX11_p.W557_K558del EX11_p.W557_K558del EX11_p.W557_V559˃C EX11_p.W557_V559˃F EX17_p.K818R EX17_p.N822H EX17_p.N822Y EX11_p.V559A EX11_p.W557G EX17_p.D820Y EX17_p.N822K EX17_p.Y823D EX17_p.D820G	COSM736 COSM1252 COSM1253 COSM1257 COSM1216 COSM1311 COSM1314 COSM1290 COSM1304 COSM1326 COSM1332 COSM1217 COSM1217 COSM1233 COSM1226 COSM1315 COSM1318 COSM19109 COSM1255 COSM1221 COSM12710 COSM1322 COSM18681 COSM1316

Procedimiento de prueba y análisis

El panel de detección de mutaciones GIST de EntroGen es un ensayo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que utiliza cebadores específicos de alelos para identificar la presencia de mutaciones somáticas en los genes c-KIT y PDGFRA. El procedimiento de prueba implica tres (3) pasos simples:

• Aislamiento de ADN de biopsias tumorales, secciones embebidas en parafina (FFPE) o tumores frescos congelados
• Amplificación de regiones de los genes c-KIT y PDGFRA usando cebadores específicos de alelo
• Análisis de los datos de amplificación capturados.

Esta prueba se puede completar en aproximadamente 2 horas desde el aislamiento del ADN hasta el resultado de la prueba.

Equipos y materiales

El panel de detección de mutaciones GIST de EntroGen requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM, VIC, ROX y CY5.

Esta prueba incluye reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN no están incluidos.

PDGFRA y c-KIT Mutaciones en GIST es para Uso en Investigación (RUO)

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de detección de mutaciones c-Kit para PCR en tiempo real	44	CKIT-RT44

* Incluye todos los controles.

Mutaciones de c-Kit en melanoma

Las mutaciones del KIT se encuentran en aproximadamente el cinco al 30 por ciento de los melanomas acrales y mucosos y los melanomas que surgen en la piel dañada por el sol de forma crónica. Las mutaciones ocurren principalmente en el exón 11 y secundariamente en los exones 13, 17 y 18.

El kit de detección de mutaciones c-Kit detecta las siguientes mutaciones:

Mutación	Identificación cósmica
EX11_ p.V559D	COSM1252
EX11_p.V559G	COSM1253
EX11_p.V560D	COSM1257
EX11_W557R	COSM1219
EX17_p.D816H	COSM1311
EX17_p.D816V	COSM1314
EX11_p.L576P	COSM1290
EX13_p.K642E	COSM1304
EX9_p.Y503_F504insAY	COSM1326
EX11_p.W557_E561del	COSM1332
EX11_p.W557_K558del	COSM1217
EX11_p.W557_V559> C	COSM1233
EX11_p.W557_V559> F	COSM1226
EX17_p.N822Y	COSM19109
EX17_p.K818R	COSM1315
EX17_p.N822H	COSM1318
EX11_p.V559A	COSM1255
EX11_p.W557G	COSM1221
EX17_p.D820G	COSM1316
EX17_p.D820Y	COSM12710
EX17_p.N822K	COSM1322
EX17_p.Y823D	COSM18681

 

Procedimiento de prueba y análisis

El kit de detección de mutaciones c-Kit de EntroGen es un ensayo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que utiliza cebadores específicos de alelos para identificar la presencia de mutaciones somáticas en los genes c-KIT. El procedimiento de prueba implica tres (3) pasos simples:

• Aislamiento de ADN de biopsias tumorales, secciones embebidas en parafina (FFPE) o aspirados de aguja fina (FNA)
• Amplificación de regiones de los genes c-KIT usando cebadores específicos de alelo
• Análisis de los datos de amplificación capturados.

Esta prueba se puede completar en aproximadamente 2 horas desde el aislamiento del ADN hasta el resultado de la prueba.

 

Equipos y materiales

El kit de detección de mutaciones c-Kit de EntroGen requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM, VIC, ROX y CY5.

Esta prueba incluye reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN no están incluidos.

Kit de detección de mutaciones c-Kit para PCR solo para Uso en Investigación (RUO)

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de análisis de mutaciones PIK3CA para PCR en tiempo real	48	PI3K-RT48

* Incluye todos los controles.

PIK3CA MUTACIONES Y CÁNCER

El gen PIK3CA codifica la subunidad p110a de la fosfatidil 3-quinasa, una lipido quinasa implicada en el crecimiento celular, la proliferación, la motilidad y la supervivencia. Tiene un papel central en la vía PI3K-AKT-mTOR. Las mutaciones somáticas en el gen PIK3CA se han implicado en la patogénesis de varios tipos de cáncer, incluidos el cáncer de colon, gliomas, cáncer gástrico, cáncer de mama, cáncer de endometrio y cáncer de pulmón.

Las mutaciones PIK3CA ocurren comúnmente en el exón 9, que codifica el dominio helicoidal y el exón 20, que codifica el dominio quinasa.

Procedimiento de prueba y análisis

La siguiente tabla enumera las mutaciones detectadas por este kit que se encuentran comúnmente en varios tipos de cáncer.

nombre de mutación	cambio de nucleótidos
E542K	C.1624G˃ A
E545K	C.1633G˃ A
E545Q	C.1633G˃ C
H1047L	C.3140A˃ T
H1047R	C.3140A˃ G

El kit de análisis de mutaciones PIK3CA de EntroGen es un ensayo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que utiliza cebadores específicos de alelos para identificar la presencia de mutaciones somáticas PIK3CA. El procedimiento de prueba implica tres (3) pasos simples:

• Aislamiento de ADN de biopsisa tumorales, secciones embebidas en parafina (FFPE) o tumores frescos congelados.
• Amplificación de regiones del gen PIK3CA usando cebadores específicos de alelo.
• Detección de producto de amplificación en un instrumento de PCR en tiempo real.

Esta prueba se puede completar en aproximadamente 2 horas desde el aislamiento del ADN hasta el resultado de la prueba.

Equipos y materiales

El kit de análisis de mutaciones PIK3CA de EntroGen requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM y VIC.

Esta prueba incluye reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN no están incluidos.

PI3K-RT48 es para Uso en Investigación (RUO)

NOMBRE DEL PRODUCTO/DescripCion	No. DE Tests	CoDIGO DEL PRODUCTO
EGFR Mutation Analysis Kit for Real-Time PCR	52	EGFR-RT52

 

El receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico es una proteína de membrana que juega un rol central en la transmisión de señales que promueven el crecimiento y la proliferación celular.
Su dominio Tirosina Quinasa activa numerosos efectores downstream que lleva a la activación de la vía RAS-RAF –MAPK.
La sobreexpresión y mutaciones oncogénicas que activan constitutivamente el dominio tirosina kinasa del EGFR han sido encontradas en varios tumores sólidos.
Además, una excesiva activación del EGFR ha sido demostrada estar asociada con estadíos avanzados del cáncer y a un pobre pronóstico.

Procedimiento y Análisis

EGFR Mutation Analysis kit está basado en la metodología de PCR en Tiempo Real que usa sondas específicas para identificar la presencia de mutaciones del EGFR. El procedimiento consta de 3 pasos simples:
* Purificación de DNA de biopsias tumorales, tejidos embebidos y fijados en parafina (FFPE), tejido fresco ó líneas celulares tumorales.
* Puesta en marcha de la PCR con los reactivos incluídos en el kit.
* Amplificación (8 reacciones por muestra) y detección usando un equipo de PCR en Tiempo Real capaz de detectar los fluorocromos FAM y VIC.

Especificaciones:

EGFR Mutation Analysis kit detecta las siguientes mutaciones de EGFR:

 

Exon 18

• G719A – 2156G>C
• G719S – 2155G>A
• G719C – 2155G>T
• G719D – 2156G>A

Exon 20

• T790M – 2369C>T
• S768I – 2303G>T
• 2307-2308 ins GCCAGCGTG
• 2319-2320 ins CAC
• 2310-2311 ins GGT

Exon 19

• 2235-2249 del 15
• 2235-2252>AAT del 18
• 2236-2253 del 18
• 2237-2251 del 15
• 2237-2254 del 18
• 2237-2255>T del 19
• 2236-2250 del 15
• 2238-2255 del 18
• 2238-2248>GC del 11
• 2238-2252>GCA del 15
• 2233-2247 del 15
• 2234-2248 del 15
• 2235-2246 del 12
• 2235-2248>AATTC
• 2235-2251>AATTC
• 2235-2252>AAT
• 2235-2255>AAT
• 2236-2248>AGAC
• 2236-2248>CAAC
• 2236-2256 del 21
• 2237-2252>T
• 2239-2247 del 9
• 2239-2256 del 18
• 2239-2248>C del 10
• 2239-2258>CA del 20
• 2240-2251 del 12
• 2240-2257 del 18
• 2240-2254 del 15
• 2239-2251>C del 13
• 2237-2253>TC
• 2237-2253>TTCCT
• 2237-2253>TTGCT
• 2237-2256>TC
• 2237-2256>TT
• 2237-2257>TCT
• 2238-2252 del 15
• 2239-2252>CA
• 2239-2253 del 15
• 2239-2256>CAA
• 2239-2257>T
• 2239-2262 del 24
• 2246-2260 del 15
• 2248-2273>CC
• 2252-2275 del 24
• 2252-2276>A
• 2252-2277>AT
• 2253-2276 del 24
• 2254-2277 del 24

Exon 21

• L858R – 2573T>G
• L861Q – 2582T>A

Limitaciones

EGFR Mutation Analysis kit requiere 40-80 nanogramos de DNA genómico (5-10 nanogramos por reacción) y puede detectar hasta un nivel de mutación < al 1%. Esta sensibilidad depende en gran parte de la extensión de la fragmentación y calidad del DNA purificado. 

Equipos y materiales 

EGFR Mutation Analysis kit requiere un equipo de PCR en tiempo real capaz de detectar las sondas marcadas con los fluoróforos FAM y VIC. 
Este test incluye los reactivos necesarios para la amplificación/detección por PCR y los controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para la purificación del DNA no estan incluidos. 

EGFR Mutation Analysis Kit es para uso en Investigación (RUO).

 

Download brochure

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Panel de ARN del cáncer de pulmón (mutaciones ROS1, RET, ALK y MET)	48	LUNG-RT48

* Incluye todos los controles

Genes de fusión en cáncer de pulmón

El cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) se asocia con frecuencia con una actividad aberrante de tirosina quinasa que activa anormalmente las vías de señalización aguas abajo. La actividad aberrante de tirosina quinasa se ha relacionado con translocaciones cromosómicas que involucran ALK, ROS1 y RET que se encuentran en 3-7%, ~ 2% y ~ 1% de pacientes con CPNM, respectivamente. La presencia de genes de fusión ALK y ROS1 predice la respuesta a varios inhibidores de tirosina quinasa (TKI) recientemente aprobados. Los pacientes con cáncer de pulmón que albergan genes de fusión RET pueden ser candidatos para inhibidores de RET que están aprobados para el tratamiento del cáncer de tiroides.

Las mutaciones de omisión del exón 14 de MET también se detectan con frecuencia en el adenocarcinoma de pulmón y ocurren en el 3-4% de los pacientes. Los pacientes que son positivos para las mutaciones de omisión del exón 14 de MET muestran una mayor sensibilidad a los inhibidores de MET.

Características del kit

El panel de ARN del cáncer de pulmón proporciona reactivos para detectar genes de fusión ALK, ROS1 y RET, así como mutaciones de omisión del exón 14 MET en ARN de pulmón humano.

El ensayo de un solo paso combina la síntesis de ADNc de primera cadena (transcripción inversa) y la posterior amplificación de genes mutantes y de referencia, minimizando el tiempo práctico y reduciendo el riesgo de introducir contaminantes durante el flujo de trabajo. El kit detecta un total de 47 variantes (ver tablas a continuación) en 8 reacciones.

Este kit es compatible con varios tipos de muestras y puede usarse para detectar mutaciones en el ARN aislado de muestras de tejido recién congeladas y fijadas en formalina e incluidas en parafina (FFPE).

Variante del gen ALK Fusion	Translocación cromosómica
EML4-ALK	E13; A20 E20; A20 E20; ins18A20 E6; A20 E6ins33; A20 E6; ins18A20 E14ins11; del49A20 E2; A20 E2; ins117A20 E13; ins69A20 E14; del14A20 E14; del36A20 E17; ins30A20 E17ins61; ins34A20 E17del58ins39; A20 E17ins65; A20 E17; ins68A20 E15del60; del71A20 E18; A20 E3; ins53A20 E6; A19

Variante del gen ROS1 Fusion	Translocación cromosómica
SLC34A2-ROS1	S4; R32 S13del; R32 S4; R34 S13del; R34
CD74-ROS1	C6; R32 C7; R32 C6; R34
SDC4-ROS1	S2; R32 S4; R32 S4; R34
EZR-ROS1	E10; R34
LRIG3-ROS1	L16; R35
TPM3-ROS1	T8; R35
GOPC-ROS1	G7; R35 G4; R36

RET Fusion Variante Genica	Translocación cromosómica
KIF5B-RET	K15; R12 K16; R12 K22; R12 K23; R12 K24; R8 K24; R11 K15; R11
CCDC6-RET	C1; R12
NCOA4-RET	N6; R12
TRIM33-RET	T14; R12

Gene	Mutación
REUNIÓ	Salto del exón 14

Equipos y materiales

El panel de ARN del cáncer de pulmón requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM, VIC y CY5. Este kit incluye una mezcla de cebador / sonda para la detección de todas las variantes mencionadas anteriormente, una mezcla de enzimas en un solo paso para la síntesis de ADNc y la detección por PCR, así como controles validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ARN no están incluidos.

Lung Cancer RNA Panel - RT48 es para Uso en Investigación (RUO)

Mutaciones en cáncer de tiroides

El cáncer de tiroides es la neoplasia endócrina más frecuente y se han identificado dos tipos de alteraciones genéticas: mutaciones puntuales en BRAF, KRAS, NRAS ó HRAS y translocaciones entre los cromosomas RET/PTC1, RET/PTC3 ó PAX8/PPAR gamma.

La detección de estos marcadores genéticos permite el diagnóstico definitivo de tumores malignos y distinguirlo de aquellos  nódulos  considerados benignos.

 

Características del kit

 El Thyroid Cancer Mutation Analysis Panel  provee los reactivos para la detección de mutaciones puntuales en los genes BRAF y RAS como también para las variantes de fusión de los genes  RET/PTC1, RET/PTC3 y PAX8/PPAR gamma. El ensayo se realiza en dos corridas: una de ellas es para la detección de las mutaciones puntuales en los genes BRAF y RAS usando DNA genómico y la otra corrida se realiza para la detección de la fusión de genes usando RNA total.

La reacción de detección de la fusión de genes usa una mix de enzima one-step que combina síntesis de cDNA y qPCR en un único paso.

El ensayo está optimizado para ser usado con ácidos nucleicos purificados de muestras incluídas en parafina (FFPE), tejido fresco y muestras de punción-aspiración con aguja fina (PAAF).

El ensayo detecta las siguientes mutaciones:

 

 Equipo y materiales

El Thyroid Cancer Mutation Analysis Panel  requiere un equipo de PCR en Tiempo Real capaz de detectar las sondas marcadas con los fluoróforos FAM y VIC. Este kit incluye la mix de sondas y primers para la detección de todas las mutaciones descriptas , las enzimas y controles validados.

Las columnas y reactivos para purificación de DNA/RNA no están incluídos.

El Thyroid Cancer Mutation Analysis Panel  es para uso en investigación (RUO)

 

 

 

 

Download brochure

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de detección de mutaciones IDH1 / 2	38	IDH-RT38

* Incluye todos los controles.

 

IDH1 / 2 Mutaciones y Cáncer

Las isocitrato deshidrogenasa 1 y 2 (IDH1 / 2) son enzimas clave en el metabolismo celular, la regulación epigenética, los estados redox y la reparación del ADN. Las mutaciones en IDH1 / 2 pueden conducir al desarrollo y / o progresión de varios tipos de cáncer, incluidos los glioblastomas secundarios y las leucemias mieloides agudas (LMA). Las mutaciones IDH1 / 2 están relacionadas con histonas anormales y metilación del ADN, lo que puede causar una diferenciación alterada de las células madre y una posible tumorigénesis. Las características únicas de las mutaciones IDH1 / 2 los convierten en buenos biomarcadores y objetivos farmacológicos prometedores.

Las mutaciones de Glioblastoma IDH 1/2 se han identificado principalmente en GBM secundaria y recientemente se ha demostrado que tienen una gran importancia pronóstica favorable. Además, la evidencia muestra que las mutaciones IDH están estrechamente asociadas con la metilación del promotor MGMT. La metilación del promotor MGMT conduce a una mayor sensibilidad a los agentes alquilantes, como la temozolomida, y tiene una importancia pronóstica similar a las mutaciones IDH. Las mutaciones IDH1 / 2 son pronósticas en GBM y se asocian con un mejor resultado que la GBM IDH1 / 2 negativa.

Leucemia mieloide aguda (AML)

Las mutaciones IDH1 / 2 se encuentran en aproximadamente el 20% de los pacientes con AML. Se sabe que las mutaciones en los genes IDH1 / 2 interrumpen varios procesos celulares, lo que finalmente impide que las células de la médula ósea maduren adecuadamente. Los inhibidores de IDH están diseñados para ayudar a las células leucémicas a madurar en células sanguíneas normales. Algunos de estos medicamentos ahora están aprobados para tratar la AML con ciertas   mutaciones del gen IDH .

 

Características del kit

El ensayo IDH 1/2 está basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que detecta mutaciones somáticas en el ADN aislado de sangre o tejido en tres reacciones multiplexadas. Funciona amplificando secuencias específicas de mutantes en muestras de ADN. Cada kit se suministra con juegos de cebadores / sondas para la detección multiplexada de genes de control tanto objetivo como interno.

 

Mutaciones detectadas

El kit de detección de mutaciones IDH1 / 2 está destinado a la detección de mutaciones somáticas IDH1 e IDH2 en el ADN genómico aislado del tejido humano.

Lista de mutaciones IDH detectadas por este kit:

Gene	Exón	un cambio	nt cambiar	Identificación cósmica	Detectado por Primer No.
IDH1	4 4	R132H R132C R132S R132G R132L R132P R132V R100Q	c.395G> A c.394C> T c.394C> A c.394C> G c.395G> C c.394_395CG> GT c.299G> A	COSM28746 COSM28747 COSM28748 COSM28749 COSM28750 COSM221574 COSM28751 COSM88208	1 2

Gene	Exón	un cambio	nt cambiar	Identificación cósmica	Detectado por Primer No.
IDH2	4 4	R172K R172M R172W R172G R172S R140Q R140W R140L R140G	c.515G> A c.515G> T c.514A> T c.514A> G c.516G> T c.419G> A c.418C> T c.419G> T c.418C> G	COSM33733 COSM33732 COSM34039 COSM33731 COSM34090 COSM41590 COSM41877 COSM41875 COSM1737874	3 4 4 5 5

Procedimiento de prueba y análisis

El procedimiento de prueba implica los siguientes pasos simples:

• Aislamiento de ADN de biopsias tumorales, secciones embebidas en parafina (FFPE), tumores frescos congelados o sangre.
• Configure la reacción de PCR utilizando los reactivos proporcionados en el kit.
• Ejecute el ensayo en un instrumento de PCR en tiempo real.
• Análisis e interpretación de datos utilizando software de PCR en tiempo real.

 

Equipos y materiales

El ensayo IDH1 / 2 de EntroGen requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM y VIC.

La prueba incluye reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN no están incluidos.

IDH 1/2 Mutation Detection Kit es para Uso en Investigación (RUO)

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de detección de metilación MGMT	60	MGMT-RT44
Kit de detección EGFRvIII	42	EGFRV3-RT42

*Incluye todos los controles

Marcadores moleculares de glioblastoma

El glioblastoma multiforme (GBM) representa la forma más mortal de tumor cerebral en humanos, y los tratamientos actuales generalmente solo brindan un beneficio menor en la supervivencia general. Los avances recientes en la comprensión de los subtipos moleculares han llevado a la identificación de una serie de biomarcadores para una clasificación más precisa de GBM. Estos marcadores moleculares muestran potencial para un mejor diagnóstico y pronóstico de pacientes con GBM. Por ejemplo, la metilación del promotor MGMT conduce a una mayor sensibilidad a los agentes alquilantes y recientemente se ha demostrado que tiene una gran importancia pronóstica favorable. EGFRvIII, la mutación EGFR más común en GBM, se encuentra en aproximadamente el 60-70% de los tumores GBM primarios amplificados por EGFR y es un objetivo potencial para las terapias experimentales.

 

Características del kit

La metilación del promotor MGMT de EntroGen y los ensayos EGFRvIII se basan en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y utilizan cebadores específicos de alelo en una reacción múltiple para identificar su objetivo. El kit de detección de metilación MGMT funciona amplificando las regiones promotoras de MGMT silenciadas epigenéticamente después del tratamiento con bisulfito de ADN para determinar el estado de metilación del promotor MGMT. El kit de detección EGFRvIII proporciona reactivos que detectan esta mutación en el ARN total aislado de las biopsias tumorales en un proceso de un solo paso (el ARN da como resultado un solo paso). Cada kit se suministra con juegos de cebadores / sondas para la detección multiplexada de genes de control tanto objetivo como interno.

 

Procedimiento de prueba y análisis

El procedimiento de prueba implica los siguientes pasos simples:

• Aislamiento de ADN o ARN de biopsias tumorales, secciones embebidas en parafina (FFPE) o tumores frescos congelados. (Para el ensayo de metilación del promotor MGMT, el ADN extraído se somete primero a un tratamiento con bisulfito).
• Amplificación utilizando los reactivos proporcionados en el kit.
• Análisis e interpretación de datos utilizando software de PCR en tiempo real.

 

Equipos y materiales

Los ensayos GBM de EntroGen requieren un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM y VIC. Las pruebas incluyen reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN y el tratamiento con bisulfito de ADN (solo ensayo MGMT) no están incluidos.

EGFRVIII-RT42 Glioblastoma Panel es para Uso en Investigación (RUO)

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de detección de metilación MGMT	60	MGMT-RT44
Kit de detección EGFRvIII	42	EGFRV3-RT42

* Incluye todos los controles

 

Marcadores moleculares de glioblastoma

El glioblastoma multiforme (GBM) representa la forma más mortal de tumor cerebral en humanos, y los tratamientos actuales generalmente solo brindan un beneficio menor en la supervivencia general. Los avances recientes en la comprensión de los subtipos moleculares han llevado a la identificación de una serie de biomarcadores para una clasificación más precisa de GBM. Estos marcadores moleculares muestran potencial para un mejor diagnóstico y pronóstico de pacientes con GBM. Por ejemplo, la metilación del promotor MGMT conduce a una mayor sensibilidad a los agentes alquilantes y recientemente se ha demostrado que tiene una gran importancia pronóstica favorable. EGFRvIII, la mutación EGFR más común en GBM, se encuentra en aproximadamente el 60-70% de los tumores GBM primarios amplificados por EGFR y es un objetivo potencial para las terapias experimentales.

 

Características del kit

La metilación del promotor MGMT de EntroGen y los ensayos EGFRvIII se basan en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y utilizan cebadores específicos de alelo en una reacción múltiple para identificar su objetivo. El kit de detección de metilación MGMT funciona amplificando las regiones promotoras de MGMT silenciadas epigenéticamente después del tratamiento con bisulfito de ADN para determinar el estado de metilación del promotor MGMT. El kit de detección EGFRvIII proporciona reactivos que detectan esta mutación en el ARN total aislado de las biopsias tumorales en un proceso de un solo paso (el ARN da como resultado un solo paso). Cada kit se suministra con juegos de cebadores / sondas para la detección multiplexada de genes de control tanto objetivo como interno.

 

Procedimiento de prueba y análisis

El procedimiento de prueba implica los siguientes pasos simples:

• Aislamiento de ADN o ARN de biopsias tumorales, secciones embebidas en parafina (FFPE) o tumores frescos congelados. (Para el ensayo de metilación del promotor MGMT, el ADN extraído se somete primero a un tratamiento con bisulfito).
• Amplificación utilizando los reactivos proporcionados en el kit.
• Análisis e interpretación de datos utilizando software de PCR en tiempo real.

 

Equipos y materiales

Los ensayos GBM de EntroGen requieren un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM y VIC. Las pruebas incluyen reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN y el tratamiento con bisulfito de ADN (solo ensayo MGMT) no están incluidos.

Productos disponibles

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de detección de un paso AML1-ETO	24	LEUK1-QRT24
Kit de detección de un paso E2A-PBX1	24	LEUK2-QRT24
Kit de detección de un solo paso MLL-AF4	24	LEUK3-QRT24
PML-RARA bcr1,2,3 Kit de detección de un paso	24	LEUK4-QRT24
Kit de detección de un paso TEL-AML1	24	LEUK5-QRT24
Kit de detección de un solo paso CBFB-MYH11	24	LEUK6-QRT24

* Incluye todos los controles.

Genes de fusión y cánceres
Muchas neoplasias hematológicas tienen translocaciones cromosómicas características que se cree que juegan un papel importante en la patogénesis de estos tumores. Las translocaciones cromosómicas encontradas en leucemias y linfomas fusionan las regiones potenciadoras / promotoras de un gen a otro, causando una expresión aberrante, o fusionando una parte de un gen con la de otro, lo que da como resultado la interrupción de la función normal de los genes nativos involucrados en la translocación, o mediante la obtención de nuevas funciones oncogénicas que promueven la proliferación y la tumorigénesis. La detección de la expresión de transcripción del gen de fusión para evaluar la enfermedad
residual mínima (MRD) se ha establecido como un indicador pronóstico independiente para la estratificación del tratamiento y el resultado del paciente en muchas leucemias. La monitorización molecular de pacientes permite a los médicos iniciar la terapia en el punto de recaída molecular.

Características del ensayo
Los kits de detección de un solo paso proporcionan reactivos para detectar y cuantificar las
transcripciones de genes de fusión que se enumeran a continuación utilizando ARN total
aislado de sangre o médula ósea.

• AML1-ETO: t (8; 21) (q22; q22)
• E2A-PBX1: t (1; 19) (q23; p13)
• MLL-AF4: t (4; 11) (q21; q23), 2 variantes: e9-e4, e9-e5
• PML-RARA: t (15; 17) (q22; q21), 3 variantes: bcr1, bcr2, bcr3 
• TEL-AML1: t (12; 21) (p13; q22)
• CBFB-MYH11: Inv (16) (p13q22), 3 variantes: tipo A, D, E

Algunos de los beneficios de usar este kit son:

• Síntesis y cuantificación de ADNc en un solo paso: no es necesario realizar una síntesis de ADNc separada y qPCR
• Bajo riesgo de contaminación: sin manipulación del producto posterior a la PCR
• Multiplexado: genes de referencia y objetivo evaluados en la misma reacción

Equipos y materiales
Los kits de detección de un solo paso requieren un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar fluorescentes FAM ™ y VIC®. No incluyen reactivos y columnas para el aislamiento del ARN total de la sangre o la médula ósea.
Estos kits incluyen reactivos necesarios para la síntesis de ADNc y la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ARN no están incluidos.

Uso previsto
Disponible solo para investigación (RUO) .

Productos disponibles

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Panel de translocación de leucemia para PCR en tiempo real	24	LEUKMP-RT24

* Incluye todos los controles.

 

Genes de fusión y leucemia

Muchas neoplasias hematológicas tienen translocaciones cromosómicas características que se cree que juegan un papel importante en la patogénesis de la leucemia. Las translocaciones cromosómicas observadas en leucemias fusionan regiones potenciadoras / promotoras o diferentes secuencias de dos genes separados. El resultado es una expresión aberrante, la interrupción de la función normal de los genes nativos involucrados en la translocación o funciones oncogénicas que promueven la proliferación y la tumorigénesis.

La detección e identificación de transcripciones de genes de fusión en muestras de sangre o médula ósea de pacientes permite un diagnóstico, pronóstico y estratificación de tratamiento precisos para ALL, APL y AML. Después del diagnóstico inicial, el monitoreo molecular de las transcripciones de genes de fusión individuales detectadas en el diagnóstico permite a los médicos iniciar la terapia en el punto de la recaída molecular, lo que ha demostrado ser beneficioso en comparación con el ajuste de la terapia en la recaída clínica.

El panel de translocación de leucemia es un ensayo multiplexado de RT-PCR de un solo paso que detecta simultáneamente 11 variantes en seis translocaciones comunes asociadas con ALL, AML y APL. El panel también incluye conjuntos de cebador-sonda para detectar abl como gen de control. El ensayo es compatible con varios instrumentos de PCR en tiempo real multicanal líderes y produce resultados en menos de 2 horas con solo 15 minutos de tiempo práctico. Los kits de RT-PCR de un solo paso para transcripciones de genes de fusión individuales están disponibles por separado para el monitoreo molecular durante el tratamiento (ver productos relacionados).

 

Características del ensayo

El Panel de translocación de leucemia proporciona reactivos para detectar e identificar las transcripciones de genes de fusión a continuación en dos reacciones de un solo paso utilizando ARN total aislado de sangre o médula ósea en el diagnóstico inicial:

 Enfermedad Translocaciones Transcripciones Fusion
TODAS t (1; 19) E2A / PBX1 (e13 / e2)
t (12; 21) TEL / AML1 (e5 / e2)
t (4; 11) MLL / AF4 (e9 / e5)
MLL / AF4 (e9 / e4)
APL t (15; 17) PML / RARα (bcr1)
PML / RARα (bcr2)
PML / RARα (bcr3)
AML Inv 16 CBFB / MYH11 (tipo A)
CBFB / MYH11 (tipo D)
CBFB / MYH11 (tipo E)
t (8; 21) AML1 / ETO (e5 / e12)

 

Los beneficios de usar el Panel de translocación de leucemia incluyen:

• Síntesis y cuantificación de ADNc de un solo paso, eliminando la necesidad de realizar una síntesis de ADNc separada.
• Bajo riesgo de contaminación.
• Las reacciones altamente multiplexadas permiten evaluar genes de referencia y objetivo en la misma reacción.
• Un flujo de trabajo rápido y eficiente. El panel también puede ejecutarse simultáneamente con el ensayo BCR-ABL p210 y p190 de EntroGen para obtener una solución integral para el diagnóstico inicial de leucemia.

 

Equipos y materiales

El panel de translocación de leucemia requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM, VIC, ROX y CY5. El panel incluye reactivos para la síntesis de ADNc y la amplificación y detección por PCR. El panel también incluye controles de reacción validados.

El panel no incluye reactivos o columnas para el aislamiento del ARN total de la sangre o la médula ósea.

 

Uso previsto

Disponible solo para investigación (RUO).

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
BCR-ABL P210 (Mbcr) Kit de detección de un paso	46	BCR210-QRT46
BCR-ABL P190 (mbcr) Kit de detección de un paso	46	BCR190-QRT46

* Incluye todos los controles

 

BCR-ABL y cánceres

Aproximadamente el 95% de los casos de leucemia mieloide crónica (LMC) y aproximadamente el 35% de la leucemia linfoblástica aguda (LLA) están asociados con la presencia de translocación cromosómica en (9; 22) (q34; q11) (cromosoma Filadelfia, Ph). Esto da como resultado la creación de un gen de fusión oncogénico entre el protooncogen ABL y el BCR en los cromosomas 9 y 22, respectivamente. El punto de ruptura en el cromosoma 22 se produce entre los exones 12 y 16 del gen BCR (también conocido como región principal del grupo de puntos de ruptura; Mbcr), mientras que el punto de ruptura en el cromosoma 9 se produce principalmente entre los exones 1 y 2 del gen ABL. Las dos variantes de fusión más comunes se denominan b2a2 y b3a2, que codifican una tirosina quinasa quimérica constitutivamente activa de 210 kDa (P210).

El punto de ruptura en el cromosoma 22 ocurre en el primer intrón del gen BCR (también conocido como región de agrupación de punto de ruptura menor; mbcr), y el punto de ruptura en el cromosoma 9 ocurre entre los exones 1 y 2 del gen ABL (e1a2). Esto une el exón 1 de BCR al exón 2 de ABL, creando una proteína de fusión de 190 kDa con un dominio de quinasa constitutivamente activo.

Se ha demostrado que los inhibidores de la tirosina quinasa inhiben en gran medida el crecimiento de las células tumorales y reducen el riesgo del paciente de alcanzar la "crisis blástica", la fase final de LMC asociada con una respuesta disminuida y corta supervivencia. La respuesta citogenética completa se logra con bastante rapidez en pacientes con LMC tratados con IM, por lo que se requiere un método sensible para detectar y cuantificar las transcripciones de genes de fusión para evaluar con precisión la respuesta durante la terapia.

RT-PCR cuantitativa de un paso

Las pautas actuales del programa Europe Against Cancer (EAC) y National Comprehensive Cancer Network (NCCN) recomiendan el uso de PCR cuantitativa en tiempo real para detectar y cuantificar la expresión de BCR-ABL antes, durante y después del tratamiento IM para evaluar la enfermedad residual mínima ( MRD) en pacientes con CML y ALL. Este ensayo está diseñado para cumplir con esas pautas.

Nuestros kits de detección de un solo paso BCR-ABL P210 (Mbcr) y P190 (mbcr) han sido formulados para la síntesis de ADNc de primera cadena altamente reproducible y la posterior PCR en tiempo real en un solo tubo. Una combinación de cebadores validados, sondas de hidrólisis y ADN polimerasa de arranque en caliente garantiza que los kits conduzcan a resultados altamente específicos y ultrasensibles en un solo paso. Utiliza el método Ct comparativo (método Pfaffl) para determinar las proporciones de genes objetivo: referencia que están alineados con la Escala Internacional (IS).

Características del ensayo

El kit de detección de un solo paso BCR-ABL P210 (Mbcr) incluye reactivos para detectar y cuantificar transcripciones de genes de fusión b2a2 y b3a2, mientras que el kit de detección de un solo paso BCR-ABL P190 (mbcr) incluye reactivos para detectar y cuantificar transcripciones de genes de fusión e1a2 utilizando ARN total aislado de sangre o médula ósea. Algunos de los beneficios de usar este kit son:

• Síntesis y cuantificación de ADNc en un solo paso: no es necesario realizar una síntesis de ADNc separada y qPCR
• Resultados alineados con IS - el estándar de control incluido con el kit P210 está alineado con los estándares primarios BCR-ABL de la OMS
• Bajo riesgo de contaminación: sin manipulación del producto posterior a la PCR
• Alto rendimiento: puede filtrar hasta 46 muestras en una sola ejecución de 96 pocillos
• Rápido: resultados en menos de 80 minutos después del inicio de la PCR
• Multiplexado: genes de referencia y objetivo evaluados en la misma reacción

Equipos y materiales

Los kits de detección de un solo paso BCR-ABL P210 (Mbcr) y P190 (mbcr) requieren un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar fluorescentes FAM ™ y VIC®. No incluyen reactivos y columnas para el aislamiento del ARN total de la sangre o la médula ósea.

Estos kits incluyen reactivos necesarios para la síntesis de ADNc y la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ARN no están incluidos.

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de detección de mutaciones ctEGFR	48	ctEGFR-48

* Incluye todos los controles.

 

Detección de mutaciones sin células

El tejido tumoral de pacientes con cáncer de pulmón no microcítico se analiza periódicamente para detectar la presencia de mutaciones somáticas en el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) para predecir la respuesta al tratamiento con el inhibidor de la tirosina quinasa EGFR (TKI). Sin embargo, en un número significativo de casos, el tejido tumoral no está disponible en cantidad suficiente para realizar pruebas moleculares precisas. Estudios recientes han demostrado la utilidad del ADN tumoral libre de células (ADNc) del plasma como fuente alternativa de material genómico para la detección de mutaciones de sensibilización y resistencia en el cáncer de pulmón.

El kit de detección de mutaciones ctEGFR de EntroGen es una prueba no invasiva y ultrasensible para detectar con precisión la presencia de mutaciones activadoras de EGFR en ADNc extraído del plasma. La prueba identifica las mutaciones somáticas más comunes en el exón 18-21 en EGFR, incluida la mutación de resistencia C797S.

 

Procedimiento de prueba

El kit de detección de mutaciones ctEGFR es un ensayo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real que utiliza cebadores específicos de mutantes para identificar la presencia de mutaciones EGFR. El procedimiento de prueba implica cuatro (4) pasos simples, que se pueden completar en aproximadamente 2 horas desde el aislamiento del ADN hasta los resultados de la prueba:

• Aislamiento de ADN a partir de plasma.
• Configuración de PCR con reactivos incluidos en el kit
• Amplificación y detección utilizando un instrumento de PCR en tiempo real.
• Análisis de los datos

 

Equipos y materiales

Este kit requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM, VIC, ROX y CY5 simultáneamente.

Esta prueba incluye reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN libre de células no están incluidos.

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de detección de mutación ctDNA RAS	40	CTRAS-RT40

* Incluye todos los controles.

 

Detección de mutaciones sin células

Se han encontrado mutaciones en KRAS y NRAS en varias neoplasias malignas, particularmente cáncer colorrectal metastásico, adenocarcinoma de pulmón y cáncer de tiroides. Varios estudios han demostrado que las mutaciones específicas en KRAS y NRAS tienen menos probabilidades de responder a las terapias anti-EGFR. [1, 2, 3] Se han desarrollado varios diagnósticos para identificar tales mutaciones. Sin embargo, en un gran número de pacientes con cáncer, la biopsia tumoral plantea un riesgo significativo para la salud, lo que limita el tejido disponible para el diagnóstico molecular actual. Los diagnósticos de biopsia líquida no invasiva están revolucionando la selección del tratamiento del cáncer, el pronóstico del paciente y el monitoreo. Los kits qPCR disponibles actualmente para detectar mutaciones RAS tienen una sensibilidad y cobertura limitadas ya que no están optimizados para fines de biopsia líquida.

Recientemente, más estudios se han centrado en la importancia de la mutación KRAS detectada en el ADN libre de células. Aunque se necesitan datos adicionales, un metanálisis mostró que la mutación KRAS en el ADNc del paciente con cáncer parece actuar como un biomarcador de pronóstico de supervivencia. [4]

El  kit de detección de mutaciones ctDNA RAS es una prueba no invasiva y ultrasensible que amplifica y detecta selectivamente 25 mutaciones KRAS exón 2 y NRAS exones 2 y 3 clínicamente significativas del ADN libre de células circulantes derivado del plasma humano.

Procedimiento de prueba

El kit de detección de mutaciones ctDNA RAS es un ensayo basado en una reacción en cadena de polimerasa (PCR) de tubo único que utiliza cebadores específicos de alelos en una reacción múltiple para identificar la presencia de mutaciones KRAS y NRAS clínicamente accionables. El ensayo funciona amplificando secuencias específicas de mutantes en muestras que contienen una mezcla de ADN mutante y de tipo salvaje y se basan en sondas fluorescentes para la detección.

El procedimiento de prueba implica tres (3) pasos simples:

• Aislamiento de ADN a partir de plasma.
• Amplificación utilizando los reactivos proporcionados en el kit.
• Análisis e interpretación de los datos.

Equipos y materiales

El kit de detección de mutaciones ctDNA RAS requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes VIC, FAM y CY5 simultáneamente.

Se incluyen todos los reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como los controles de reacción validados. Los reactivos para el aislamiento de ADN se venden por separado.

Referencias
[1] Andreyev, HJ y col. (2001) Mutaciones de Kirsten ras en pacientes con cáncer colorrectal: el estudio 'RASCAL II'. Br J Cancer 85, 692-696
[2] Esteller, M. y col. (2001) K-ras y p16 aberraciones confieren mal pronóstico en el cáncer colorrectal humano. J Clin Oncol 19, 299-304
[3] Douillard, JY. et al. (2013) Tratamiento y mutaciones RAS en cáncer colorrectal. N Engl J Med 369, 1023-1034
[4] Zhuang, R, Li S, Li Q, Guo X, Shen F, Sun H, et al. (2017) El valor pronóstico de la mutación KRAS por ADN libre de células en pacientes con cáncer: una revisión sistemática y un metanálisis. PLoS One 12 (8): e0182562.

Nombre del producto / Descripción	No. de reacciones *	Código de producto
Kit de detección de mutaciones ctBRAF	48	ctBRAF-48

* Incluye todos los controles.

 

Detección de mutaciones sin células

Más del 50% de los melanomas metastásicos albergan una mutación activadora de BRAF en el codón 600. Las pruebas de estas mutaciones en el tejido tumoral se realizan de manera rutinaria para guiar la terapia. Estudios recientes han demostrado la utilidad de detectar mutaciones BRAF en el ADN libre de células aislado del plasma de pacientes diagnosticados con melanoma para complementar o reemplazar las pruebas en el tejido. Además, se ha demostrado que las mutaciones en el ADN libre de células se correlacionan con la progresión de la enfermedad cuando se utilizan para controlar la respuesta al tratamiento durante el curso de la terapia.

EntroGen ha desarrollado una prueba de PCR en tiempo real no invasiva y ultrasensible para la detección de mutaciones BRAF V600 en el ADN libre de células aislado del plasma. Los estudios de rendimiento analítico han demostrado que la prueba puede detectar números de copia de un solo dígito de la variante BRAF y requiere una baja cantidad de ADN (2 ng) por muestra. La prueba detecta las mutaciones BRAF V600E, V600E2, V600K y V600D.

Procedimiento de prueba

El kit de detección de mutaciones ctBRAF de EntroGen es un ensayo basado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real que utiliza cebadores específicos de mutantes para identificar la presencia de mutaciones BRAF V600. El procedimiento de prueba implica tres (3) pasos simples, que se pueden completar en aproximadamente 2 horas a partir del ADN aislado del plasma para obtener los resultados de la prueba:

• Configuración de PCR con reactivos incluidos en el kit
• Amplificación y detección utilizando un instrumento de PCR en tiempo real.
• Análisis de los datos

 

Equipos y materiales

El kit de detección de mutaciones ctBRAF requiere un instrumento de PCR en tiempo real capaz de detectar sondas fluorescentes FAM y VIC simultáneamente.

Esta prueba incluye reactivos necesarios para la amplificación / detección de PCR, así como controles de reacción validados. Las columnas y reactivos para el aislamiento de ADN libre de células no están incluidos.